糖化酶的制備

  糖化酶又稱葡萄糖淀粉酶，其作用方式不像α-淀粉酶那樣無作用次序,而是從底物鏈的非還原性末端開始,順次切下一個(gè)個(gè)葡萄糖單位,遇到分支處的α-1,6糖苷鍵時(shí),可將α-1,6糖苷鍵切開,然后繼續(xù)作用α-1,4糖苷鍵,直到產(chǎn)物全部成為葡萄糖為止。但糖化酶對α-1,6糖苷鍵的作用速度遠(yuǎn)不及對α-1,4糖苷鍵的作用速度，因此水解支鏈淀粉多的淀粉時(shí)，需延長水解作用時(shí)間或添加部分支鏈淀粉酶。
  我國糖化酶的生產(chǎn)主要由黑曲霉優(yōu)良菌種經(jīng)深層發(fā)酵精制提煉而成。本實(shí)驗(yàn)利用黑曲霉具有多種活力較強(qiáng)酶系的特點(diǎn)，利用淀粉類物質(zhì)為原料，獲得制備淀粉水解糖所需的糖化酶。

一、實(shí)驗(yàn)材料

1. 菌種：黑曲霉（Aspergillus niger）

2. 儀器：潔凈工作臺(tái)、滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、高速冷凍離心機(jī)、高壓滅菌鍋

二、實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)流程：保藏菌種®菌株活化及平板擴(kuò)大培養(yǎng)®搖瓶培養(yǎng)

1.菌株活化及擴(kuò)大培養(yǎng)

①制備PDA培養(yǎng)基：去皮馬鈴薯200g切成小塊，加水約500mL，煮沸30min，然后用紗布過濾，濾液加蔗糖20g，瓊脂20g。溶化后加水定容至1000mL，分裝于250ml錐形瓶中，121℃滅菌20min，自然pH。

②接種：取滅菌后PDA培養(yǎng)基倒平板，冷卻后，接種斜面保藏的黑曲霉菌種，28℃恒溫培養(yǎng)3d。

2.搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)

①發(fā)酵培養(yǎng)基的制備：

玉米粉培養(yǎng)基：玉米粉30g,米糠5g,麩皮5g,加水1000ml,拌勻至無干粉又無結(jié)團(tuán)，分裝于250 ml錐形瓶內(nèi)，每瓶100ml, 自然pH，121℃滅菌20 min。

②接種與產(chǎn)酶培養(yǎng):取培養(yǎng)72h的黑曲霉平板，用打孔器打孔制成菌片。每個(gè)錐形瓶中接種12片，放在恒溫培養(yǎng)箱中28℃培養(yǎng)96 h。

3.離心

將搖床培養(yǎng)4d的黑曲霉發(fā)酵液4層紗布過濾后離心（10000r/min，10min）除菌體，所得上清液即為糖化酶粗酶液。