細胞電轉染的步驟

   轉染是真核細胞主動或被動導入外源DNA片段而獲得新的表型的過程。電擊完成后用恒溫培養箱進行測試也是很關鍵的步驟，下面給大家介紹下電轉染詳細步驟。

1.清洗電轉杯，將電轉杯置于75%酒精中浸泡2小時，然后在紫外燈下照射后即可使用。

2.電穿孔前一天，以合適密度傳代細胞，使細胞在轉染前出于對數生長期。對于原代培養細胞，一般培養2-3天后，細胞單層融合度可以達到70-80%，即可開始試驗。

3.PBS洗細胞2次后，胰酶消化細胞2min，待細胞變圓后，用*培養基終止消化。

4.輕輕吹下細胞成單細胞懸液后，1200rpm室溫離心5min。

5.*棄去上清，根據細胞數量，加入適量的電轉緩沖液重懸細胞（一般為0.5-0.6ml左右），并上下吹打均勻。

6.加入適量相應濃度的待轉染核酸至相應的終濃度（質粒為20ug/ml，SiRNA的終濃度為100nM），上下吹打均勻。若以0.5ml計算，所需質粒為0.5×20=10ug。

7.將含有相應濃度核酸的細胞懸液轉移入相應規格的電轉杯中，按照預定條件設置參數，進行電擊操作。

8.電擊完成后，將電轉杯置于恒溫培養箱中8-12min，以使核酸充分進入細胞。

9.將電擊杯從恒溫培養箱中取出，接種細胞懸液于預熱的培養基中，上下吹打均勻后，置于培養箱中正常培養。

10.正常培養4h，待細胞貼壁后，給細胞換新鮮的*培養基，以去除上層的死細胞。

11.培養24h后,即可進行細胞轉染效率的檢測或是進行細胞的實驗處理。