細胞傳代的操作步驟

     喆圖小編今天來講講細胞傳代的操作步驟：需要準備的器材：酒精噴壺、PBS緩沖液、胰酶、培養(yǎng)基、巴氏吸管、水浴鍋、移液器、離心管、超凈臺、CO2培養(yǎng)箱、離心機等。

     然后我們要把我們準備的器材放入超凈臺，打開紫外殺菌燈滅菌，需要注意的是若培養(yǎng)的細胞對溫度比較敏感，將培養(yǎng)基瓶子放入37℃的水浴鍋中，使得培養(yǎng)基溫度在37℃，再轉移到超凈臺紫外滅菌，當然一般的細胞對培養(yǎng)基的溫度不是很敏感，不用對培養(yǎng)基加溫也是可以的。細胞培養(yǎng)間也需要紫外照射半小時左右。

  接下來小編就開始來操作了，全程嚴格無菌操作！

  1、紫外照射滅菌后，穿好滅菌服，戴好滅菌手套和口罩。

  2、從CO2培養(yǎng)箱中取出細胞培養(yǎng)瓶，用酒精噴壺在培養(yǎng)瓶表面噴灑75%酒精消毒，轉移培養(yǎng)瓶到超凈臺。

  3、打開蓋子，輕輕吸出舊的培養(yǎng)液，用巴氏吸管加入適量PBS緩沖液洗滌1-2次，棄去PBS緩沖液。

  4、可用移液器加入2-3ml胰酶，“十字”晃動，使胰酶充分接觸細胞。

  5、將加入胰酶的細胞培養(yǎng)瓶轉移到倒置顯微鏡載物臺，鏡下觀察細胞消化情況，當細胞變圓且大量脫落時，準備終止消化，用75%的酒精噴灑培養(yǎng)瓶表面，轉移到超凈臺

  6、用移液器加入等量含血清培養(yǎng)基，終止消化。移液器充分吹打，使細胞能夠*脫落。

  7、將培養(yǎng)瓶中混合液體轉移至離心管中，配平，離心5分鐘左右。

  8、離心好后，用酒精噴壺噴灑離心管表面，轉移進超凈臺，打開蓋子，將上清液倒入廢液缸。

  9、加入適量體積含血清培養(yǎng)基，用移液器或巴氏吸管輕輕吹打，制成細胞懸液。

  10、將細胞懸液分裝進3個潔凈滅菌培養(yǎng)瓶，加入適量培養(yǎng)基，蓋好蓋子

  11、將分裝好的培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡載物臺，觀察細胞情況，細胞應保證一定數量，數量太少會影響生長情況。

  12、在培養(yǎng)瓶上做記號，注明傳代時間，細胞種類，操作人員等信息。在放入CO2培養(yǎng)箱之前應再次用酒精噴一噴培養(yǎng)瓶表面，然后整理操作臺，用75%酒精擦拭超凈臺臺面，清理廢液和垃圾。

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