培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)的充分準(zhǔn)備

      接下來(lái)喆圖小編就來(lái)說(shuō)說(shuō)培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)該準(zhǔn)備那些東西，包括耗材的處理、試劑的配置，無(wú)菌檢驗(yàn)等等。

      玻璃器皿的清洗。對(duì)于玻璃器皿要先用洗衣粉刷干凈，然后沖干凈。用酸液浸泡 24 h 以上，之后用清水沖洗 8-10 遍，除去殘留酸液。瓶子之類，沖洗過(guò)程要使勁搖晃。然后在雙蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎，放于鼓風(fēng)干燥箱中160℃烘烤 2 h 待用。

      試劑配置。細(xì)胞培養(yǎng)用的液體一般使用雙蒸以上的水即可。并注意 pH 值的調(diào)節(jié)。

     無(wú)菌檢驗(yàn)，主要采用過(guò)濾除菌：如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各類培養(yǎng)基、丙酮酸鈉、谷氨酰胺等，有些可以采用高壓滅菌。

      試劑分裝保存，包括營(yíng)養(yǎng)液、胰酶、血清等。

      血清特別重要，血清必須貯存于 –20℃的低溫保存箱中，如果一次無(wú)法用完一瓶，可將 40～50ml 分裝于無(wú)菌酸處理瓶中，甚至置青霉素瓶保存。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾，勿直接過(guò)濾血清。

       瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃ 冰箱全溶后再分裝，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。

       熱滅活是指 56℃，30 分鐘加熱已*解凍血清。恒溫水浴鍋升到 56℃后，將血清放入，待溫度升高到 56℃ 后計(jì)時(shí)，一般 5 分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清對(duì)細(xì)胞的影響。

       實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，超凈臺(tái)以紫外燈照射 30 分鐘滅菌，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟超凈工作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)數(shù)分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。

       每次操作只處理一株細(xì)胞株，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以 70 % ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。

       無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暫時(shí)放置，其它個(gè)人實(shí)驗(yàn)用品用完應(yīng)立即拿出。實(shí)驗(yàn)用品以 70% 乙醇擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在中央無(wú)菌區(qū)域，一般勿在邊緣區(qū)域操作。

      小心取用無(wú)菌實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約 45° 角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。

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