菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)

      種子培養(yǎng)期染菌的危害MAX大，因嚴(yán)格防止。一旦發(fā)現(xiàn)種子染菌，均應(yīng)滅菌后棄去，并對(duì)種子罐及其管道進(jìn)行*滅菌。發(fā)酵前期養(yǎng)分豐富，容易染菌，此時(shí)養(yǎng)分消耗不多，應(yīng)將發(fā)酵液補(bǔ)足必要養(yǎng)分后迅速滅菌，并重新接種發(fā)酵。發(fā)酵中期染菌不但嚴(yán)重干擾生產(chǎn)菌株的代謝，而且會(huì)影響產(chǎn)物的生成，甚至使已形成的產(chǎn)物分解。由于發(fā)酵中期養(yǎng)分已被大量消耗，代謝產(chǎn)物的生成又不是很多，挽救處理比較困難，可考慮加入適量的抗生素或殺菌劑。如果是發(fā)酵后期染菌，此時(shí)產(chǎn)物積累已較多，糖等養(yǎng)分已接近耗盡，若染菌不嚴(yán)重，可繼續(xù)進(jìn)行發(fā)酵;若污染嚴(yán)重，可提錢放罐。染菌程度越重，危害越大;染菌少，對(duì)發(fā)酵的影響就小。所以喆圖小編給大家講講實(shí)際生產(chǎn)中，應(yīng)當(dāng)根據(jù)污染程度和發(fā)酵時(shí)期區(qū)別對(duì)待。

        1 實(shí)驗(yàn)器材與試劑

1.1 器材

熱空氣消毒箱、超凈工作臺(tái)、振蕩培養(yǎng)箱、顯微鏡、天平、三角瓶、試管、移液管、培養(yǎng)皿、 接種針、平板涂布器、酒精燈、載玻片

1.2 試劑 營(yíng)養(yǎng)瓊脂、葡萄糖、磷酸二氫氨、七水合硫酸鎂、氯化鈉、磷酸氫二鉀、C8H9Cl、蛋白胨、0.4%酚紅溶液、蒸餾水、番紅染液、香柏油、擦鏡液

        1.3培養(yǎng)基

(1)營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：直接稱量營(yíng)養(yǎng)瓊脂粉4.5g，溶于100mL蒸餾水配制，pH7.2，分裝到試管中， 滅菌后擺成斜面。

(2)種子培養(yǎng)基：葡萄糖 0.5%、磷酸二氫氨 0.1%、七水合硫酸鎂 0.02%、氯化鈉 0.5%、磷酸氫二鉀 0.1%

(3)葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基：C8H9Cl 0.3%、蛋白胨 0.8%、 葡萄糖 0.5%、 氯化鈉 0.5%、 0.4% 酚紅溶液，pH7.2

        2實(shí)驗(yàn)方法

2.1種子的擴(kuò)大培養(yǎng)

2.1.1斜面培養(yǎng)基的配制

配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，分裝，滅菌(121℃條件下滅菌 30min)，倒斜面。

        2.1.2菌種的活化

⑴將大腸桿菌采用無(wú)菌操作的方法接種于斜面上，恒溫培養(yǎng)箱37 ℃下培養(yǎng)18h;

⑵培養(yǎng) 18h 后，觀察菌落顏色是否一致，若均為黃色，挑取培養(yǎng)皿周邊的菌落進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè);若顏色有黃有白，則兩種顏色的菌落均要進(jìn)行無(wú)菌檢測(cè)。檢測(cè)方法常用染色鏡檢，若檢測(cè)后，沒(méi)有污染，便可進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng);若檢測(cè)到雜菌，要重復(fù)上述步驟，直到無(wú)菌為止，否則，不能繼續(xù)下一步操作。

        2.1.3擴(kuò)大培養(yǎng)

在無(wú)菌條件下，從檢測(cè)后的活化培養(yǎng)基上挑取10個(gè)左右菌落，用接種針接種到擴(kuò)大培養(yǎng)基(即種子培養(yǎng)基)中，于37℃下振蕩培16-18h，觀察菌落形態(tài)。然后配合顯微鏡形態(tài)觀察，根據(jù)結(jié)果來(lái)判斷能否進(jìn)行下一步。

        2.2污染的檢測(cè)和判別

        2.2.1顯微鏡檢查

⑴取樣：用無(wú)菌操作方式取發(fā)酵液少許,涂布在載玻片上;

⑵制片、染色：自然風(fēng)干后,用番紅染液染色 1-2min，水洗;

⑶干燥后用油鏡下觀察。

2.2.2平板檢查

⑴配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，滅菌，倒平板;

⑵取少量待檢發(fā)酵液經(jīng)稀釋 (大約 10–6～10–7) 后涂布在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，在電熱恒溫培養(yǎng)箱中 37℃下培養(yǎng) 24h;

⑶觀察菌落形態(tài)。

2.2.3肉湯培養(yǎng)檢查法(用于檢測(cè)培養(yǎng)基滅菌是否*)

將1ml待測(cè)液(滅菌處理后的種子培養(yǎng)基)接入葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基中，于37℃下培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)基的狀態(tài)和顏色。

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