菌種的誘變育種之液晶顯示生化培養(yǎng)箱

    喆圖小編以紫外線處理產(chǎn)蛋白酶的海洋細(xì)菌，通過透明圈法初篩，選擇蛋白酶活力高的菌株。

實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備

    產(chǎn)蛋白酶菌株、超凈工作臺(tái)、電磁力攪拌器、低速離心機(jī)、培養(yǎng)皿、涂布器、10mL 離心管、吸管、250mL三角瓶、恒溫?fù)u床、液晶顯示生化培養(yǎng)箱、直尺、棉簽、橡皮手套。

培養(yǎng)基和試劑
    1) 無菌生理鹽水、75%酒精

    2) 篩選培養(yǎng)基：脫脂奶粉培養(yǎng)基

    3) 海水2216E 液體培養(yǎng)基

實(shí)驗(yàn)步驟

    1. 出發(fā)菌株移接新鮮斜面培養(yǎng)基，于28℃液晶顯示生化培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)24h；
    2. 將活化后的菌株接種于液體2216E 培養(yǎng)基，于28℃ 恒溫培養(yǎng)搖床150rpm 振蕩培養(yǎng)12h；
    3. 取1ml培養(yǎng)液于5ml離心管中，10000rpm 離心5min，棄去上清液，加1ml無菌生理鹽水，重新懸浮菌體，再離心，棄去上清，重復(fù)上述 步驟用1ml生理鹽水恢復(fù)成菌懸液；
    4. 將1ml上述菌懸液倒入無菌空平板中，再加入10ml無菌生理鹽水，磁力攪拌1min。 
    5. 將紫外燈打開，預(yù)熱30min；
    6．打開無菌平板蓋，紫外照射處理60s，照射完畢后先蓋上平板蓋，再關(guān)閉攪拌和紫外燈；
    7.取處理過的菌懸液0.1ml涂布1個(gè)篩選平板；
    8.將誘變菌液在液晶顯示生化培養(yǎng)箱28℃黑暗中培養(yǎng)過夜，然后在紅燈下稀釋涂菌進(jìn)行初篩（避光培養(yǎng)），觀察在菌落周圍出現(xiàn)的透明圈大小。

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