用液晶顯示生化培養箱培養神經元原代細胞

     神經元培養的原代細胞，是較難培養的一種細胞。關鍵就是大鼠年齡的選擇，是胎鼠，新生鼠還是成年大鼠，理想的是胎鼠。今天喆圖小編就從這個說起，用液晶顯示生化培養箱培養大鼠海馬神經元原代細胞的幾種培養的方法。

     1.剖宮產取出胚胎，放在保存液中移至顯微鏡下操作取出胎腦，去掉小腦，從中線切開左右大腦半球。剝去軟腦膜以及脈絡叢血管。然后鈍性分離海馬，顯微鏡下用剪刀剪下海馬即可

     2. 每個取出的海馬組織都放置在含有4℃培養液的試管中。快速分離數個胎鼠海馬后就可以做消化和細胞計數了。消化液用經典的胰蛋白酶于液晶顯示生化培養箱中 37℃恒溫 30分鐘即可。然后吹打(1000ul tip 10-20次，2ml 灼燒拉伸的玻璃管，口徑與200ul tip相當，吹打10-20次)到看不到組織為止。很多protocol建議此刻離心。消化后去上清，留1-2ml直接吹打，然后就可以直接細胞計數。

     3.神經元會長的很大，所以密度要低，50000/ml就可以了，100mm的plate, 5-7ml。培養液用無血清無抗生素加B27和N2的DMEM效果就很好。培養皿要用PDL和含血清以及抗生素的培養液預處理72小時。這樣可以避免感染也讓神經元容易附著和分化。每一周加1-2ml的新鮮培養液，于液晶顯示生化培養箱中37℃恒溫，2-3周即可成熟。

     4.染色檢測：后就是標記蛋白檢測，一般可用MAP2標記神經纖維，一些神經遞質受體標記突觸，NeuN標記神經元細胞核。

     以上實驗內容僅供參考，詳情請聯系喆圖客服！