使用二氧化碳培養箱培養HCC827細胞

       注意事項

       凍存細胞接收后的處理：

       1.干冰運輸，收到細胞后立即轉入-80℃冰箱短暫中轉或直接復蘇；
       2.收到細胞后，若發現干冰已經*揮發、凍存管瓶蓋破裂脫落,請立即拍照后與我們聯系。
 

       1.收到細胞后，請首先檢查培養瓶是否破損或漏液，培養液是否混濁，如有漏液及培養液混濁情況請立即拍照把圖片發給我們。
 

       2.75%酒精消毒瓶身后放二氧化碳培養箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認細胞狀態并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養基接種至新的培養瓶或培養皿中。
 

       3.建議收到當天不要消化處理，如果細胞長滿90%，可選擇傳代處理。
 

       4.如您收到細胞3天內沒有反饋相關問題，出現的細胞問題將不提供免費重發服務。
 

       1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
       ①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
       ②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
       ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回二氧化碳培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
       ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
       ⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
       ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
       

       2、細胞復蘇：
       ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
       ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
 

       3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
       ①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
       ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養基終止消化；
       ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
       ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。