牛血清在細胞培養中的作用與質量要求

       檢查方法：

已證明無外源因子污染的牛細胞培養物，在細胞生長液中加15％待測血清，連傳3代共21天。陰性對照細胞培養液
中加15％已知無病毒污染的牛血清，與試驗組同條件下進行。在觀察期內注意細胞形態變化或細胞病變。在觀察
期內第14天待檢樣品和對照樣品用標準病毒檢測方法檢查。
如待檢細胞培養物經胰酶消化后分種到6個含蓋玻片的容器內。陰性對照樣品按同樣方法。再將牛腹泄病毒、牛細
小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼腸弧病毒分別加入待檢培養物蓋玻片容器內作為陽性對照，再培養7天，用熒光
抗體技術進行檢查。
細胞病變或病毒引起的其他改變通過蘇木精或伊紅染色進行觀察。取另外一個待檢細胞培養瓶用人“O”紅細胞、
豚鼠紅細胞和新鮮雞紅細胞作血球吸附病毒檢查。試驗在2～8℃和20～24℃進行。陰性對照細胞預先感染副流感
Ⅲ型病毒作為陽性對照。未感染的細胞作為陰性對照。
3）內毒素檢測
用鱟試劑檢查。
4）細菌噬菌體檢查
主要檢查E.Coli（C300 or K-12）噬菌體。
5）激素含量測定
每批FBS對某些激素含量都要進行測定，包括：雌二醇、胰島素、孕硐、睪丸素、甲狀腺素等。
6）血紅蛋白檢測
血紅蛋白與氧合血紅蛋白的比≥70％，血紅蛋白含量≤mg15/dl。
7）細胞生長效果測定
a.細胞克隆效果測定
細胞選擇：Sp20/Ag-14 或P3X63-Ag8.653
血清濃度與細胞數:
10％血清／1個細胞／孔
4％血清／5個細胞／孔
細胞培養基RPMI－1640， 96孔培養盤36℃±2℃，5％二氧化碳培養10～
15天。試驗中選擇一個已知參考牛血清作對照。
克隆效率計算：
克隆效率＝（陽性孔平均數/ 培養孔總數） X100％ 
相對克隆效率＝待測血清克隆效率/參考血清克隆效率
b.貼壁效率試驗：
用人的傳代細胞作每批血清的貼壁效率試驗，A549（人肺癌細胞）該細胞可以反應出低濃度血清的貼壁變化。采
用6孔培養盤每批血清用兩種濃度和兩種不同的細胞接種數即10％血清――100細胞／孔，4％血清200介細胞／孔
。放36℃±2℃，濕潤5％二氧化碳培養箱培養10～14天，計算著色細胞克隆，確定貼壁效率。從這兩種不同血清
濃度來確立實驗血清支持細胞貼壁生長的水平，分析兩種試驗條件下平均貼壁效率。
貼壁效率（％）＝（每孔克隆平均數/ 每孔活存的培養細胞平均數） X100％
相對貼壁效率＝被測血清貼壁效率/參考血清貼壁效率
c. 二倍體纖維細胞促生長試驗
人二倍體細胞株 WI28 MRc5
25cm2細胞培養瓶，5％血清，每瓶接種1.5X105細胞連傳3代，每代血清濃度和接種細胞數相同，每代培養7天，每
代接種二個細胞瓶，36℃±2℃培養。以同樣條件用已知參考血清進行平行培養。每代收獲細胞計數，計算每批待
檢血清與參考血清的相對生長率（RGR）。
RGR＝（試驗血清每瓶細胞平均數/ 參考血清每瓶細胞平均數） X100％