二氧化碳培養箱做細胞培養及凍存

實驗材料

二氧化碳培養箱、液氮罐、超低溫低溫冰箱、電熱恒溫水浴鍋、離心機等。

培養皿、滴瓶、吸管、離心管、燒杯、量筒、三角瓶、培養瓶等

下面喆圖小編給大家說下簡易的實驗步驟

將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM*培養基，輕輕吹勻，離心2min，棄上清液。加入10ml DMEM培養基清洗，棄上清液。加入10ml DMEM*培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的二氧化碳培養箱中培養。

 細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10ml PBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入二氧化碳培養箱3min。加人1ml DMEM*培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10ml PBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管離心2min，棄上清液。再加入10ml PBS（經滅菌，保存于40℃）吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的二氧化碳培養箱繼續培養。

   加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內，立即放入一80℃超低溫冰箱內，過夜，第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放入可以保存90天。