海馬神經元細胞分離培養實驗

海馬神經元細胞分離培養實驗
1、儀器
CO2細胞培養箱，解剖鏡，眼科鑷，眼科剪
2、動物
新生鼠（SD大鼠）
3、耗材
DMEM/F12培養基、聚賴氨酸
實驗步驟：
包被：培養前一天將培養板或培養瓶或皿用0.01%多聚賴氨酸包被過夜。第二天早上來吸除包被液在無菌超凈臺中自然晾干后放置于CO2細胞培養箱中備用。
配制神經元專用培養基（DMEM/F12培養基中添加1%谷氨酰胺，2% B27，1%雙抗）
取腦：選取新生24h之內的SD大鼠數只,雌雄不限,75%酒精全身消毒,斷頭處死,無菌條件下分層剪開頭皮,顱骨,用彎鑷拉開腦區視野，小心取出全腦，用預冷的PBS洗數次；
分離：以腦中線為起點，小心撥開大腦顳葉皮層，暴露出新月狀海馬回，小心夾出海馬組織，置于預冷的PBS中，仔細剔除微血管，用眼科剪充分剪碎組織。
消化：加入同體積0.125%的胰蛋白酶，放入CO2細胞培養箱中消化30分鐘，期間每隔5分鐘輕搖一下。
過濾：加入數滴胎牛血清終止消化，用吸管輕輕吹打細胞數分鐘，至液體成米糊狀即停止吹打，動作務必輕柔，用200目細胞篩過濾收集細胞懸液。
接種：1000rpm離心5分鐘，去除上清，用DMEM/F12培養基重懸細胞，輕輕吹打，調整細胞濃度為100000個每毫升，接種于包被好禁止晃動；
換液：6小時后將DMEM/F12培養液全量換成神經元專用培養液，第48小時后加入一定濃度的阿糖胞苷，以抑制非神經元細胞過度生長，隨后每3天半量換液。