細胞培養的三種常見問題及解決方案

培養細胞不貼壁
可能原因：1.胰蛋白酶消化過度；2.支原體污染；3.培養基pH值過堿（NaHCO3分解）；4.細胞老化；5.接種細胞起始濃度太低或太高。
解決方法：1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；2.分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物；3.使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2；4.啟用新的保種細胞；5.調節最佳接種細胞濃度。

懸浮細胞成簇
可能原因：1.培養液中含鈣,鎂離子；2.支原體污染；3.蛋白酶過度消化使得細胞裂解；4.DNA污染。
解決方法：1.用無鈣鎂平衡鹽溶液洗滌細胞，輕巧吹吸；2.細胞獲得單細胞懸液；3.分離培養物，檢測支原體；4.DNasel處理細胞。

培養細胞生長緩慢
可能原因：1.由于更換不同培養液或血清；2.培養液中一些細胞生長必須成分如谷氨酰胺或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞；3.培養物中有少量細菌或真菌污染；4.試劑保存不當；5.接種細胞起始濃度太低；6.細胞已老化；7.支原體污染。
解決方法：
1.比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗，讓細胞逐漸適應新培養液；2.換入新鮮配置培養液，或補加谷氨酰胺及生長因子；3.用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物；4.血清需保存在-10到-20℃。培養液需在2-8℃避光保存。含血清培養液在2-8℃保存，需在1周內用完；5.增加接種細胞起始濃度；6.換用新的保種細胞；7.分離培養物，檢測支原體。清潔支架和培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。